Sažetak
Uvod: Autofagija predstavlja proces koji ćelije koriste kako bi eliminisale stare, neiskorišćene i oštećene citoplazmatske komponente. Interakcija između autofagije i citokina mogla bi da bude jedan od mehanizama koji koordinira aktivnost urođenog i adaptivnog imunskog sistema. U zavisnosti od vrste ćelije i puta aktivacije, autofagija i proinflamatorni citokini imaju različit uzajamni uticaj. Razumevanje ravnoteže između ova dva procesa u imunskim ćelijama potrebno je da bi se ostvario terapijski potencijal regulacije autofagije u različitim infektivnim, inflamatornim i autoimunskim bolestima.
Cilj rada: Cilj ovog istraživanja bio je da se ispitiva uloga farmakološke modulacije autofagije na ekspresiju informacione RNK za proinflamatorne citokine TNF, IL-1 i IL-6 u monocitnoj ćelijskoj liniji THP-1.
Materijal i metode: Uticaj farmakoloških modulatora bafilomicina i trehaloze, određivan je merenjem autofagnog fluksa, odnosno procenom konverzije LC3-II nakon prethodnog blokiranja njegove degradacije, pri čemu se nivo LC3-II analizira metodom imunoblota. LC3 predstavjla marker autofagije i smatra se da nivoi LC3-II koreliraju sa brojem autofagozoma. Pomoću RT-qPCR metode određivano je na koji način bafilomcin i trehaloza modulacijom autofagije utiču na ekspresiju proinflamatornih citokina TNF, IL-1 i IL-6, tako što su merene vrednosti koncentracije iRNK navedenih citokina. Statistička analiza je urađena pomoću GraphPad Prism programa i korišćen je t test.
Rezultati: Imunoblot analiza je potvrdila da bafilomicin blokira autofagni fluks tako što povećava intracelularne nivoe LC3-II, sprečavajući njegovu lizozomalnu degradaciju. Trehaloza je povećala nivo LC3-II, kako u prisustvu tako i u odsustvu bafilomicina, što potvrđuje njenu sposobnost da indukuje konverziju LC3-II u THP-1 ćelijama. RT-qPCR analizom uzoraka THP-1 ćelija tretiranih trehalozom dobijeno je značajno povećanje ekspresije, a kod tretiranih bafilomicinom značajnjo smanjenje ekspresije iRNK za citokine TNF, IL-1 i IL-6 u odnosu na kontrolni uzorak ćelija koje nisu tretirane.
Zaključak: Na osnovu rezulata dobijenih u ovom istraživanju može se zaključiti da autofagija aktivira ekspresiju proinflamatornih citokina (TNF, IL-1, IL-6) tako što povećava transkripciju njihovih gena u THP-1 ćelijama.
Ključne reči
Array
Array
Array